高脂饲料诱导大鼠构建NAFLD模型

非酒精性脂肪肝(NAFLD)包含了一系列的疾病发展阶段,从一般脂肪变性进展到脂肪变性与炎症并发的非酒精性脂肪肝炎(NASH),随后进展为肝纤维化、肝硬化和肝癌。大多数肥胖的成年人有脂肪肝型态,他们的患病率达到30%以上,因此,NAFLD的患病率会随着肥胖率的升高而升高。

为研究NAFLD的发病机制并找出治疗方法,建立动物模型是至关重要的一步。科研人员大多利用高脂饲料诱导大鼠建立NAFLD模型,但近几年建立的NAFLD动物模型所采用的高脂饲料配方、建模周期均不一致,在研究方面具有不同的参考价值。本文对多种高脂饲料诱导大鼠建立NAFLD模型的方法进行总结,如有疑问,欢迎与我们的技术团队讨论。

饲养环境

环境是饲养实验动物的必要条件之一,对于实验动物的成活率有着很大的影响,在相关论文中对温度和湿度几乎都有详细叙述,并强调了它的重要性。考虑到NAFLD模型对环境并无特殊要求,所以科研人员一般采取了22±2℃,湿度50%-60%,12小时循环照明的普通饲养环境。

不过值得注意的是,大鼠对于环境的变化很敏感,因此要保证饲养环境各项指标的稳定。同时由于高脂饲料的缘故,大鼠的排泄物异味更重,需要及时更换垫料,饲料和饮水也需要灭菌处理,以免对实验造成不必要的影响。

实验大鼠的选择

作为实验的受体,大鼠的选择十分重要,这不仅关系到实验成本,也决定了建模的质量及周期。

清洁级别

对于大鼠的清洁级别选择,综合多篇参考文献,即便使用普通动物,对实验结果也没有明显影响,但考虑到降低大鼠死亡率和实验成本,清洁级别越高的大鼠无疑是越好的。

种类选择

对于实验大鼠的选择主要有Wistar大鼠和SD大鼠。其中SD大鼠相对发育更快,适应能力更强,更利于建模;缺点是价格较高,性格更凶猛。综合考虑,我们认为SD大鼠仍然是更好的选择,但如果预算较少也可以选择前者。

性别选择

在查阅参考的十多篇文献中,科研人员无一例外的选择了雄性大鼠。由于成年的雌性动物代谢存在着明显的周期性,这可能会对实验造成影响,所以在大部分实验中,科研人员更倾向于选择雄性大鼠进行实验。

体重选择

成年大鼠的体重可达300g,考虑到实验时间一般为8-12周,我们认为选取5-6周,即120g-200g的大鼠比较合适。值得注意的是,大鼠之间的体重差异必须小于10%,以免引入无关的变量,对实验结果造成干扰。

高脂饲料配方

高脂饲料的配方无疑是NAFLD建模最关键的因素之一,合适的高脂饲料可以实现低死亡率低,快速建立模型的目标。以下我们将对于高脂饲料的配方进行详细探讨。

猪油含量

猪油含量是高脂饲料的核心,更高的猪油含量可以快速建立NAFLD模型,但会影响大鼠食欲及死亡率;猪油含量过低则会造成建模周期长,症状不明显。在《高脂血症非酒精性脂肪肝大鼠模型的建立》中,科研人员虽然采用了42%猪油含量的高脂饲料在第8周建模成功,但个人认为并不可取,因为如此高的猪油含量会大幅度提高大鼠死亡率。我们建议使用10%猪油含量的高脂饲料,可以在12-16周得到症状较明显的NAFLD模型,而且在环境适宜的情况下,通常不会有大鼠死亡。如果要缩短建模周期,可以适当提高猪油含量,但需要加入其它物质来促进吸收。

其它物质

由于高脂饲料在适口性方面不如常规饲料,会导致大鼠采食量下降,在一些实验中甚至出现了实验组大鼠体重低于对照组的情况。所以很多研究人员在高脂饲料中添加了胆盐(1%),以提高大鼠食欲,促进消化吸收。同时也可以在饲料中添加胆固醇(1%-5%),以促进脂肪肝的形成,缩短建模周期。

建模周期

建模周期和许多因素相关,不能一概而论。例如高脂饲料中的猪油含量对建模周期的影响就非常大。以下我们将讨论使用10%猪油含量饲料前提下所需的建模周期。

在《高脂饮食诱导肥胖与肥胖抵抗型非酒精性脂肪肝大鼠模型的建立》中,研究人员在8周停止建模,解剖大鼠,表明建模成功,但症状较轻,大部分大鼠处于轻度和中度肝炎。而上文提到的研究中,建模时间长达16周,但症状明显,大部分大鼠处于中度和重度肝炎。综上所述,可以证明12-16周是比较合适的建模周期,具体时间可结合需要选择。

木棒磨牙

在《非酒精性脂肪肝动物模型的建立与思考》中,科研人员考虑到高脂饲料质地偏软,所以为实验组大鼠提供了木棒磨牙,结果确实提高了大鼠存活率,体重也是实验组高于对照组的理想状况。

剔除肥胖基因抵抗大鼠

《高脂饮食诱导肥胖与肥胖抵抗型非酒精性脂肪肝大鼠模型的建立》一文中探讨了肥胖抵抗基因大鼠对于建立NAFLD模型的影响。实验结果表明,在同样的饲养条件下,肥胖抵抗基因大鼠的症状确实轻于普通大鼠,这不利于NAFLD模型的建立,所以在实验前应当将其剔除。

总结

高脂饲料诱导大鼠建立NAFLD模型,应选择120-200g的雄性SD大鼠,剔除肥胖抵抗基因大鼠;环境温度应控制在22℃左右,湿度50%-60%;喂养10%猪油含量的高脂饲料,可添加胆盐和胆固醇,在12-16周基本可以建模成功。

本文参考资料来源:

1.《高脂血症非酒精性脂肪肝大鼠模型的建立》刘庆丰/李中东/施孝金著;

2.《高脂饮食诱导肥胖与肥胖抵抗型非酒精性脂肪肝大鼠模型的建立》王莹/王鸿/蔡东联著;

3.《大鼠非酒精性脂肪肝模型构建的方法探讨》杨晓红/徐富翠/余鸿著;

4.《非酒精性脂肪肝动物模型的建立与思考》王敏/闫曙光著

标签:大鼠饲料高脂饲料 上一篇: 下一篇:
展开更多

loading...

loading...